مطالعه فعالیت ضد قارچ دفنسین(defensin) بیان شده در سیستم پروکاریوتی بر رشد برخی قارچ های بیماری زای گیاهی

چکیده فارسی: در این تحقیق ژن دفنسین(rs-afp1) گیاه تربچه با استفاده از pcr از ناقل puc19 جداسازی و سپس در ناقل بیانی pet26b(+) کلون گردید. صحت کلون شدن ژن در ناقل با استفاده از colony pcr وهضم آنزیمی مورد تأیید قرار گرفت و ناقل نوترکیب حاصله pet26rs1 نام گذاری گردید. ناقل pet26rs1به باکتری e. coli bl21(de3) plyss منتقل گردید و با iptg 1میلی مولار و در دماهای 37 و28 درجه سانتیگراد القاءء گردید. نتایج به دست آمده هیچ گونه بیان قابل اندازه گیری را نشان نداد. پس از ناقل pet 24d(+)استفاده گردید. این ناقل نیز دارای خصوصیاتی مشابه ناقل pet26b(+) می باشد اما فاقد توالی pel b می باشد. ژن rs-afp1 در این ناقل کلون شده و به باکتری e. coli bl21(de3)plyss منتقل گردید. اثر فاکتورهای مختلف iptg? دما و زمان نمونه گیری بعد از القاء بر روی بیان rs- afp1 با استفاده از تست تاگوچی بهینه سازی گردید. بر اساس این تست? از چهار سطح مختلف iptg (mm 2/.، 5/.، 7/. و 1)? زمان های مختلف القاء (2، 4، 6و 16 ساعت بعد از القاء) و درجه حرارت(23، 28، 30و 37 درجه سانتیگراد) در 16 حالت بررسی گردید. نتایج حاصل از ژل الکتروفورز پروتئین های حالت های مختلف با ژ‍ل اسکنر کمی گردید. نتایج حاصله نشان داد که دمای 28 درجه سانتیگراد و غلظت 1 میلی مولار iptg و زمان 6 ساعت بعد از القاء بهترین شرایط بیان rs-afp1 در باکتری e. coli می باشد. اثر پروتئین های به دست آمده بر قارچ های alternaria brassicola? botritis cinerea و scholorotinia sclorotirium با استفاده از دو روش radial diffusion و spore germination بررسی گردید. نتایج حاصله نشان داد که این پروتئین می تواند رشد قارچ های فوق را مهار کند وبیشترین اثر را بر a. brassicolaدارد.از این رو می توان نتیجه گرفت که پروتئین مزبور در سیستم پروکاریوت به صورت فعال بیان می گردد و می تواند رشد قارچ را مهار کند. کلمات کلیدی:دفنسین تربچه ، rs-afp1، تست تاگوچی، بهینه سازی بیان? بیان پروکاریوتی